Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中所逐渐扩展

从第一次显露现口内自身免疫催化到显露现1型号肾病针灸腹泻的令人满意率在儿童初期就有很好的阐述，多个口内自身免疫催化感染性的儿童里有70%在血清转换后10年内患有肾病，而随访15年的儿童这一比重减低到84%。相对之下，占针灸1型号肾病一半以上的型号1型号肾病的发病机制还没得到充分的深入研究。

越来越多的人开始适用分段系统来假设1型号肾病的令人满意：生殖在显露现多种口内自身免疫催化时重回第1阶段性，显露现血糖异常时重回第2阶段性，显露现腹泻时重回第3阶段性。一些多发口内自身免疫催化感染性的生殖，在1期和2期，令人满意慢速，并发展为发病的1型号肾病。我们此前阐述了举例来说在首次验证到多种口内自身免疫催化样品后将近10年无肾病的更慢速令人满意者，这分组病征人数不及，但特点非常指明。随后，我们发现口内自身抗原特异性CD8+T蛋白催化在令人满意极快速的病征里基本不依赖于，但在近期发病和近十年依赖于的肾病病征里很容易验证到。这可能说明了，与令人满意病征相对，这些病征自身免疫催化的调节增强。

中期深入研究说明了，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常，但肾病病征依赖于一些特性缺陷，其里有数对IL-2的催化能力降低。此外，肾病病征里的畸变CD4+T蛋白可能对调节更具抵抗性，本体现为畸变T蛋白的依赖性减弱，自然地导致的Treg和本体外导致的诱导Treg，以及抗原随之而来的CD4+T蛋白里IL-2催化减弱。本深入研究的用意是阐述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群极极快速令人满意者里的特点，他们的成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以一些人为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病征亲族里检查和1型号肾病的危险性因素。我们此前阐述了近十年极快速令人满意者的特点，他们维持多重口内自身免疫催化感染性有约10年，但没显露现肾病的针灸腹泻，慢速性或非开展性自身免疫。随后，10名暂时维持无肾病并愿意缺不及大量血液循环样品的极快速令人满意者纳入T和B蛋白特性系统性。在现今的深入研究里，8名慢速令人满意者(SP分组)，里位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身免疫催化感染性。所有的参加者都属于1型号肾病令人满意的1期，尽管一些人随后失掉了口内自身免疫催化对某些抗原的感染性催化，然而，一名病征已经属于2期将近6年，但没显露现针灸腹泻，一名病征被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性里对该NAD开展了除此以外审核。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，使用多表达式流式蛋白绝技和T蛋白依赖性试验审核NAD里Treg的阈值、遗传基因号和特性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和转回)开展无督导聚类系统性，审核Treg遗传基因号。

结果：与身体健康NAD相对，来自慢速令人满意本体的梦境CD4+T蛋白的督导聚类推测，激已逝的梦境CD4+ Treg阈值减低，与止痛药诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述减低有关。一名HbA1c增大的病征与令人满意极快速者和也就是说的对照分组相对，Treg五音有所不尽相同。特性系统性说明了，与身体健康NAD相对，来自极快速令人满意本体的Treg抑制的CD4+畸变T蛋白依赖性轻微受损。本体现为对畸变CD4+T蛋白CD25和CD134表述的依赖性减低。

示意图1 深入的遗传基因号系统性推测，CD4+Treg亚型号在慢速令人满意函数调用里减低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NAD的已逝CD4+CD45RA -蛋白上。根据标明物表述比对显露10个元簇:梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不尽相同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值分组周边上色。每个键值里的碗示意图暗示单个标明的表述行政级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推测整本体标明表述。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成示意图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说稀土元素为每个metacluster盒新线示意图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白(l)。紫色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的预测号声称，Treg阈值的减低是令人满意极快速的标志。分级奈斯(a - f)和玉米系统性(g-k)较为SP参加者和也就是说的HD参加者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团本体的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述开展分离，模拟FlowSOM小团本体。(b) HD(黑点)和SP(白点)分组以及NADSP 606(紫色)里CD25+ cd127的阈值概要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的盒新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述低压着色，箭头突显露的簇被辨别为SP和HD函数调用两者之间的不尽相同。(j)盒新线示意图推测了在SP(白点)和HD(灰点)分组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的一般来说稀土元素(比重)。(k)直方示意图推测每个簇的遗传基因号(粉红色)和Treg标明一般来说表述与故事情节表述(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇里标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与身体健康献血者相对，令人满意极快速者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T蛋白元簇(梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热示意图(sp606不有数在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述串联，推测直方示意图(c)和概要示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NAD有数，p< 0.05(黄色)NADSP 606和也就是说的HD不有数在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)串联，推测直方示意图(e)和概要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自极快速令人满意的CD4+ treg蛋白依靠畸变CD4+T蛋白的能力降低。SP分组用黄色的新线和带子暗示，HD分组用黑色的新线和带子暗示，紫色的新线/带子暗示NADsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标明为CFSE, Treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠重置蛋白，养成3同一天开展流式蛋白绝技验证。(a-d)与CD4+这样的话者一般来说应的treg养成(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者养成。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。适用感染性对照(激已逝的响应蛋白不含treg)计算出来依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

示意图5 畸变CD4+T蛋白对极快速令人满意的T蛋白重置的依赖性更敏感。SP分组用黄色的新线和带子暗示，HD分组用黑色的新线和带子暗示，紫色的新线/带子暗示NADsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标明，treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠重置蛋白，养成3同一天开展流式蛋白绝技(CD25反染)和蛋白因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者携手养成。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性次之(b)。(c,d) CD25依赖性次之(c)和CD134依赖性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

结论：我们推断的结论是，来自极快速令人满意子的重置梦境CD4+Treg在GITR表述里得到了拓展和丰富，突显了必要性深入研究Treg在1型号肾病危险性性生殖里的系统性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28