Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展加速的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肾脏自身HIV到经常出现1同型哮喘临床病征的的发展率在儿童一时期就有很好的阐述，多个肾脏自身HIV乙型肝炎的儿童里有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的儿童这一比重提高到84%。相对来说来说之下，占临床1同型哮喘一半以上的同型1同型哮喘的得病机制还无法给与充分的科学研究。

越来越多的人开始可用分段控制系统来度量1同型哮喘的的发展：生殖在经常出现多种肾脏自身HIV时进入第1期中，经常出现食欲异常时进入第2期中，经常出现病征时进入第3期中。一些多发肾脏自身HIV乙型肝炎的生殖，在1期和2期，的发展较快，并发展为得病的1同型哮喘。我们先前阐述了一分组在首次探测到多种肾脏自身HIV抽取后据估计10年无哮喘的极慢的发展者，这分组高血压生产量少，但构造非常明确。随后，我们见到肾脏自身肝细胞选择性CD8+T该线粒体反应会在的发展较快的高血压里大体上不存在，但在早先得病和长年存在的哮喘高血压里很很难探测到。这可能表明，与的发展高血压相对来说来说，这些高血压化脓性反应会的恒定增强。

早期科学研究表明，尽管恒定性T该线粒体(Treg)生产量正常，但哮喘高血压存在一些功能缺陷，其里包括对IL-2的反应会能力降低。此外，哮喘高血压里的震荡CD4+T该线粒体可能对恒定更具抵抗性，观感为震荡T该线粒体的抑制逼近，自然导致的Treg和粘液导致的抑制Treg，以及肝细胞经历的CD4+T该线粒体里IL-2反应会逼近。本科学研究的目的是阐述了CD4+恒定性T该线粒体(Treg)在一小群极较快的发展者里的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下确诊的高血压亲族里检查1同型哮喘的致命诱因。我们先前阐述了长年较快的发展者的构造，他们保持一致多重肾脏自身HIV乙型肝炎大约10年，但无法经常出现哮喘的临床病征，慢性或非完成性化脓性。随后，10名再次保持一致无哮喘并愿意提供大量血液抽取的较快的发展者纳入T和B该线粒体功能分析。在现期中的科学研究里，8名慢的发展者(SP分组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身HIV乙型肝炎。所有的大多数人都处于1同型哮喘的发展的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身HIV对某些肝细胞的乙型肝炎反应会，然而，一名高血压早就处于2期据估计6年，但无法经常出现临床病征，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里对该NADP完成了单独分析报告。分离外周血单个核该线粒体(PBMCs)，换用多值流式该线粒体妖术和T该线粒体抑制试验车分析报告NADP里Treg的频率、变异和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无行政官员聚类分析，分析报告Treg变异。

结果：与有益NADP相对来说来说，来自慢的发展体的梦境CD4+T该线粒体的行政官员聚类推断，激活的梦境CD4+ Treg频率提高，与糖皮质激素抑制的TNFR相关蛋白(GITR)坚称提高有关。一名HbA1c升高的高血压与的发展较快者和给定的对照分组相对来说来说，Treg谱并不相同。功能分析表明，与有益NADP相对来说来说，来自较快的发展体的Treg介导的CD4+震荡T该线粒体抑制明显受损。观感为对震荡CD4+T该线粒体CD25和CD134坚称的抑制提高。

示意图1 有系统的变异分析推断，CD4+Treg亚同型在慢的发展字段里提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -该线粒体上。根据标识物坚称鉴定出10个元簇:梦境T该线粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T该线粒体;HLA-DR + GITR +梦境T该线粒体;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可用9个不同Treg标识作用于的10个元簇的MST。每个数据流值得一提的是一个集群(100个集群)，较小的元集群(10个元集群)在数据流分组周围上色。每个数据流里的饼示意图坚称单个标识的坚称级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整体标识坚称。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster筒该线示意图(重元素> 0.05%)相符为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T该线粒体(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T该线粒体(l)。橘色带三子值得一提的是人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 可用CITRUS的实测证实，Treg频率的提高是的发展较快的图标。标准离三子通道(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP大多数人和给定的HD大多数人在CD4+CD45RA−T该线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的指标性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR坚称完成分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(白斑)和SP(白斑)分组以及NADPSP 606(橘色)里CD25+ cd127的频率概要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离三子通道三子集的筒该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3坚称强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD字段之间的不同。(j)筒该线示意图推断了在SP(白斑)和HD(灰点)分组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(比重)。(k)直方示意图推断每个簇的变异(粉红色)和Treg标识相对来说坚称与背景坚称(蓝色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里标识的坚称有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

示意图3 与有益献血者相对来说来说，的发展较快者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T该线粒体元簇(梦境T该线粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T该线粒体;HLA-DR + GITR +梦境T该线粒体;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个坚称标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的坚称热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR坚称接在，推断直方示意图(c)和概要示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(橘色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和给定的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR坚称，从标准离三子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)接在，推断直方示意图(e)和概要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

示意图4 来自较快的发展的CD4+ treg该线粒体控制震荡CD4+T该线粒体的能力降低。SP分组用蓝色的该线和带三子坚称，HD分组用金色的该线和带三子坚称，橘色的该线/带三子坚称NADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体完成分选。CD4+CD25−(转发者)被标识为CFSE, Treg按检视的比重硫酸铜。用抗CD3 /28微珠激活该线粒体，培育出3天后完成流式该线粒体妖术探测。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育出。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制比率。可用乙型肝炎对照(激活的作出反应该线粒体含treg)量化抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 震荡CD4+T该线粒体对较快的发展的T该线粒体激活的抑制更敏感。SP分组用蓝色的该线和带三子坚称，HD分组用金色的该线和带三子坚称，橘色的该线/带三子坚称NADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标识，treg按检视的比重硫酸铜。用抗CD3 /28微珠激活该线粒体，培育出3天后完成流式该线粒体妖术(CD25反染)和该线粒体因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者都由培育出。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE抑制比率(b)。(c,d) CD25抑制比率(c)和CD134抑制比率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出里的坚称。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自较快的发展三子的激活梦境CD4+Treg在GITR坚称里给与了扩展和充沛，强调了有利于科学研究Treg在1同型哮喘风险生殖里的互补的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28